OBJETIVO: Determinar la asociaciòn de los
microsatèlites con la diabetes
TIPO DE MUESTRA: Se realiza la extracciòn de ADN a partir de 3 ml de sangre obtenida de cada
paciente utilizando kit de extracciòn de ADN de introvirgen.
ACIDO NUCLEICO: DNA genòmico
GEN O SECUENCIA PARA AMPLIFICACION: A patir del ADN extraido, se
amplificaron los fragmentos correspondientes a los 3 microsatèlites de la
region 4p15.1 utilizando los partidores
(primers) D4S2912, D4S230 y D4S3001 con el siguiente protocolo: Se realizo la
mezcla para PCR en un volumen de 10ul conteniendo buffer de PCR 1x, 0.4ul de
dNTP, 1.75mmol de MgCl2 (D4S2912), 1.5mmol de MgCl2 (D4S3001) Y 1.25 mmol de
MgCl2 (D4S230), 0.4ul de cada primer, 0.25U de Amplitag Gold (Applied biosystem)
y 1ul de ADN genòmico.
TIPO DE PCR: Simple, 40 ciclos
CONDICIONES DEL PROTOCOLO DEL PCR:
- Desnaturalizacion: 94º C por 10 min; : 94º C por 30 seg
- Hibridación: 55º C por 30 seg
- Extensión:
72º C por 30 seg; y 72º C por 10 min
VISUALIZACIÓN: Los productos del PCR se analizaron
en el secuenciador automatico ABIPRISM-10 con electroforesis (EFO)
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA:
http://www.scielo.org.pe/pdf/hm/v15n1/a02v15n1.pdf
Ok 1
ResponderBorrar