viernes, 24 de julio de 2020

Prueba de Secuenciacion para la Diabetes Mellitus 2

Las células de los islotes pancreáticos son fundamentales para mantener los niveles normales de glucosa en sangre,y su falla desarrolla la diabetes. Se utilizo la secuenciación de ARN de una sola célula para determinar los transcriptomos de 1,492 células pancreáticas humanas α, β, δ y PP de donantes de órganos de diabetes tipo 2 y no diabéticos, así como 245 genes con expresión alterada en la diabetes tipo 2. El 92% de los genes no se han asociado previamente con la función o el crecimiento de las células de los islotes. Se encontró una buena correlación general de los transcriptomos entre el ratón y las células α y β humanas.La comparación de perfiles de genes en células α y β humanas y de ratón reveló una expresión específica de especie y se comprobó cuidadosamente la viabilidad, calidad de secuenciación y  de células individuales. Solo se detectó en un pequeño número de células, esto se debe a la variabilidad inherente en la expresión génica.

                                   

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:


sábado, 18 de julio de 2020

Articulo de PCR para Diabetes Mellitus 2

OBJETIVO: Determinar la asociaciòn de los microsatèlites con la diabetes
TIPO DE MUESTRA: Se realiza la extracciòn de ADN  a partir de 3 ml de sangre obtenida de cada paciente utilizando kit de extracciòn de ADN de introvirgen.
ACIDO NUCLEICO: DNA genòmico
GEN O SECUENCIA PARA AMPLIFICACION: A patir del ADN extraido, se amplificaron los fragmentos correspondientes a los 3 microsatèlites de la region 4p15.1  utilizando los partidores (primers) D4S2912, D4S230 y D4S3001 con el siguiente protocolo: Se realizo la mezcla para PCR en un volumen de 10ul conteniendo buffer de PCR 1x, 0.4ul de dNTP, 1.75mmol de MgCl2 (D4S2912), 1.5mmol de MgCl2 (D4S3001) Y 1.25 mmol de MgCl2 (D4S230), 0.4ul de cada primer, 0.25U de Amplitag Gold (Applied biosystem) y 1ul de ADN genòmico.
                        
TIPO DE PCR:  Simple, 40 ciclos
CONDICIONES DEL PROTOCOLO DEL PCR:
  •   Desnaturalizacion: 94º C por 10 min; : 94º C por 30 seg
  •   Hibridación: 55º C por 30 seg
  •   Extensión: 72º C por 30 seg;  y 72º C por 10 min
VISUALIZACIÓN: Los productos del PCR se analizaron en el secuenciador automatico ABIPRISM-10 con electroforesis (EFO)


                                     

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA:
http://www.scielo.org.pe/pdf/hm/v15n1/a02v15n1.pdf